命运之夜汉化版是以同名动漫为原型打造的二次元剧情冒险RPG，玩家将置身于圣杯战争的宏大背景中开启冒险旅程。游戏设有多条故事线与丰富结局，玩家的每一个选择都会直接左右剧情的发展方向。在探索过程里，玩家能逐步深入了解完整的世界观，同时沉浸式地参与到角色的成长历程与命运抉择之中。此外，玩家还可以操控多个拥有专属技能和独特战斗风格的英灵角色，为战斗过程带来多样化的体验。
1、卫宫士郎（衛宮士郎，ShirouEmiya）
身高：167cm，体重：58kg
男主角是穗群原（Homurabara）学园高中部二年级的学生，同时也是一名见习魔术师，还是10年前冬木（Fuyuki）市那场大火里为数不多的生还者之一。他被身为魔术师的卫宫切嗣救下并收养，受卫宫切嗣的影响，他成了个英雄迷，还发誓长大后一定要成为“正义的伙伴”，去拯救所有正在遭受苦难的人。因此，只要是别人的请求，他从来不会拒绝。他擅长分析物件的构造，能解析眼中看到的任何东西的构造，还很会修理电器，有着轻微的毒舌属性，成为Archer后这一属性变得更为明显。
2、Saber
身高：154厘米，体重：42公斤，三围：胸围73厘米、腰围53厘米、臀围76厘米，属性：秩序（存在意义）・善（目的意义）
本作Saber线－Fate的女主角。在第四次与第五次圣杯战争中，她以Saber职阶被召唤，作为剑兵英灵与士郎缔结契约。这位拥有耀眼金发与深绿眼眸的美少女，额前还俏皮地翘着一根呆毛。她的职阶（Class）在所有从者里堪称顶尖。性格上，她忠诚可靠、严谨认真，话不多却极富责任感，对第四次圣杯战争的过往几乎绝口不提，但偶尔也会流露出少女般的娇憨模样。随着Fate线剧情推进，到后半段时，她也对士郎萌生了爱意。
3、远坂凛（遠坂凛，RinTohsaka）
血型：O型，身高：159cm，体重：47kg，三围：B77/W57/H80（单位：cm），生日：2月3日（原日期为2月4日，后调整为2月3日）
在《Fate/stay night》的Unlimited Blade Works路线里，凛是当仁不让的女主角。她和卫宫士郎在同一所高中就读，不仅是容貌出众的美少女，更是实力不俗的魔术师。作为魔术名门远坂家的正统继承人，远坂家的历史可以追溯到久远之前，相传其先祖曾受“第二魔法使”基修亚·泽尔里奇·修拜因奥古的指点（这一点在HF路线中曾被简要提及）。而远坂家世代肩负着管理冬木市这片土地的职责，凛也继承了父亲的遗愿，投身到了圣杯战争之中。
4、间桐樱（間桐桜，SakuraMatou）
身高：156厘米，体重：46公斤，三围：胸围85厘米、腰围56厘米、臀围87厘米，生日：3月2日，血型：O型
这是《Fate/stay night》樱线——Heaven's Feel的女主角。她是间桐慎二的义妹，比卫宫士郎低一年级，在同年级里是颇有名气的美人，同时也是弓道社的成员。在士郎面前，她总是面带笑容，性格沉稳。当初作为慎二的妹妹与士郎初次见面时，尽管内心善良温柔，却显得有些阴郁沉闷，还有用头发遮住脸庞的习惯。
5、伊莉雅丝菲尔·冯·爱因兹贝伦（Illyasviel von Einzbern）
身高：133厘米，体重：34千克，三围：胸围61厘米、腰围47厘米、臀围62厘米
爱称“伊莉雅”（イリヤ，Iriya），作为七名御主之一，她是“Berserker”的御主。身为爱因兹贝伦家的大小姐，伊莉雅是该家族为圣杯战争专门培育的人造人，也是本次圣杯战争里实力最强的御主。她外表看起来只有十岁左右，实际年龄却比士郎大一岁，是士郎名义上的姐姐，有着一头雪白的长发和红色的眼睛。
6、间桐慎二（間桐慎二，ShinjiMatou）
身高：167cm，体重：57kg
士郎的同班同学，过去和士郎关系尚可，同时担任弓道部副主将，不过后来由于性格等因素，在第五次圣杯战争中成为了士郎的对手。他是间桐樱的哥哥，对名义上的妹妹樱态度非常恶劣，曾因殴打樱致使她留下伤痕，为此被士郎教训过。他性格糟糕，惯于欺软怕硬，既好色又冷血，在男生群体里像公敌一样遭人厌恶，但凭借外貌和家境优渥等条件，受到部分女孩子的青睐。他曾追求过凛，却被对方无视了。
7、言峰绮礼（言峰綺礼，KireiKotomine）
身高为193厘米，体重是82千克，生日在12月28日，血型为B型。
此次圣杯战争的监督神父，同时也是教会的“代行者（Executer）”，言行复杂，常有常人难以理解之处。他曾参与上一次（第四次）圣杯战争，还是远坂凛的监护人与师兄，喜爱麻婆豆腐。尽管身为代行者，在本作中他并未使用过黑键（HF线里绮礼曾提及，若想战胜从者，需配备代行者专用武器黑键；关于黑键使用者，可参考《月姬》中埋葬机关的代行者——希耶尔（Ciel，シエル））。
在原著里，故事的结局总计有45个。这当中，Badending/Deadending的数量达到了四十次，不过有一个士郎死亡的结局被划分到了NormalEnd的范畴；剩下的五个是主角以胜利者的身份结束第五次圣杯战争的正面结局（需要说明的是，并非所有BadEnding里的士郎都没能取得胜利，只是从剧情走向来看它们属于负面结局）。这五个胜利结局具体如下：
1、Fate（Saber路线）
唯一结局：梦的延续
完成圣杯战争、履行与士郎的约定、摧毁圣杯后，Saber终于得以卸下从者的身份，带着微笑向士郎道出那句“我爱你”。获得解脱的王者返回自己的时代，归还精灵之剑，怀着王的骄傲，在树下安然长眠。
2、UnlimitedBladeWorks（无限剑制（凛路线）
TrueEnd：BrilliantYears
和士郎、Archer的相遇，让Saber更加坚定了自身的信念。怀着对士郎的感情，Saber如同Fate路线那般，继续踏上她未完成的旅途。Archer在朝阳中离开，把过去的自己托付给了凛。经历残酷的战争后，士郎决定跟随凛学习魔术，两人也定下了相伴一生的约定。这个结局里还提到，凛在毕业后会去英国伦敦塔进修，并且邀请士郎一同前往伦敦。
GoodEnd：SunnyDay
即便经历了两次圣杯战争的残酷厮杀，Saber依旧未能明确自己的意志，于是她决定依靠凛和士郎的魔力，以“使魔”这一不触及圣杯规则的契约形式留在现世。在与士郎、凛一同度过幸福的三人生活的过程中，她也在尝试探寻属于自己的信念。
3、
Heaven'sFeel（樱路线）
至少完成[Saber]、[凛]路线其中一条的结局后，才能解锁这条路线。所有的伏笔与真相都会在这条路线里揭晓，随着路线的推进，玩家能够完整知晓所谓圣杯战争真正的“样貌”。
TrueEnd：春天归来
伊莉雅丝菲尔牺牲自己的生命留住了士郎的魂魄，凛则依靠一个人偶让士郎得以复活。随后，拥有圣杯机能、魔力近乎无限的樱，通过补充魔力的方式维系着士郎的生命力。凛从伦敦归来后，看样子也参与到其中。ufotable也把这个结局改编成了动画电影。
在老虎道场第39回中，曾指出该线是真正的结局。不过，奈须蘑菇后来已否定了这一说法。而TYPE-MOON的世界设定为平行宇宙，也就是说每个故事版本都可以被看作是“真实”发生过的。
NormalEnd：樱之梦
士郎施展最后的投影，摧毁了即将成型的圣杯，自身也彻底崩解。获得救赎的樱在卫宫邸住了下来，始终盼着能与他重逢，直至生命的终点。
4、“RéaltaNua”版追加结局
LastEpisode（最后的结局）
RéaltaNua是爱尔兰语，意思是新生。2007年在PlayStation2平台推出的《RéaltaNua》版本里，额外增加了Fate线的后续补完结局“LastEpisode”（最后的结局）。这个剧情需要完成全部45个结局后才会解锁。在Fate线中，Saber实现了作为王的理想，前往理想乡；之后士郎与Saber在理想乡再度重逢。根据LastEpisode结尾的说明，这片草原就是阿瓦隆。
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